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荧光探针及其应用的制作方法
时间:2021-6-21发布者:杭州汉迪生物技术有限公司a

脂滴(Lipid droplets,LDs)由磷脂单分子表层和中性脂内核组成,是细胞内中性脂的主要贮存场所,广泛存在于多种动植物细胞中。近来的研究发现脂滴并非是一个“惰性”的能量贮存器,而是一个活跃的多功能细胞器,它的异常与肥胖,II型糖尿病,脂肪肝,高脂血症和动脉粥样硬化等疾病有着密切联系。因此,脂滴的检测对生物医学研究和临床诊断具有重要意义。近年来,荧光检测方法以其高灵敏性、高分辨率、操作简单和价格低廉而逐渐成为生物医学研究的重要研究手段。商业化的脂滴荧光染料主要有尼罗红(Nile Red)和 BODIPY493/503,但是,它们仍存在着一些重要缺陷:荧光背景强和斯托克斯位移小。更糟的是,这些传统的荧光分子还面临着聚集诱导淬灭 (aggregation-caused quenching,ACQ)的问题。ACQ迫使这些分子只能在低浓度下使用,进而在成像中极易因光漂白而荧光强度快速减弱。从2001年聚集诱导发光(aggregation-induced emission,AIE)的提出至今,香港科技大学唐本忠院士课题组便致力于利用AIE的概念解决一些传统荧光分子面临的问题,AIE脂滴荧光探针便是其中一个方面。相比传统商用荧光染料,AIE脂滴荧光探针在成像上具有亮度高,斯托克斯位移大和光稳定性好的优点,能满足研究中细胞内脂滴的跟踪与分析的要求。
然而,这些AIE脂滴荧光探针仍然存在激发波长短的问题,导致在组织切片中有较强的背景荧光和较低的穿透深度等问题。为解决这些问题,大量的精力投入到合成长波长激发的荧光染料,然而成功的例子却寥寥无几。该方案主要面临的挑战是增大分子间共轭引起了合成困难,分子量变大,分子疏水性增强,细胞穿透性降低,红光量子产率低等问题。另一方面,双光子激发在生物医学研究和临床诊断中越来越受欢迎。双光子激发是指物质在强激光下同时吸收了两个低能量的光子(一般是近红外光子)而从基态跃迁到激发态的非线性光物理过程。随着飞秒泵浦激光器的商业化,双光子激发或双光子荧光成像已经越来越普及。相比于单光子激发,双光子激发具有长波长激发,较少自发荧光,高3D分辨率,较少光漂白和较深的组织穿透深度等优点。若能将AIE 特征与双光子激发的结合起来,构建一个双光子AIE荧光探针,便可以为脂滴跟踪和分析提供优越的生物探针,促进脂滴相关疾病的研究。


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